副溶血弧菌惯例查询及其3种基因(tlh、tdh及trh)

时间:2019-01-31 00:33 来源:365bet备用投注 作者:admin

常规调查副溶血性弧菌及其三种基因(tlh,tdh和trh)LAMP检测方法 粱 【摘要】Vibrioparahaemolyticus是一种重要的食源性致病菌。食用受此细菌污染的食物的人会引起腹泻和呕吐等症状,甚至引起脱水,休克和死亡。 目前,副溶血性弧菌引起的食物中毒规模不断扩大,已成为中国主要的食源性致病菌。 因此,执行的分布,形态和类型的例行调查副溶血性弧菌的理解,并开发副溶血性弧菌检测的新方法显得尤为重要。 目前,虽然已经有在该国介导等温扩增循环(LAMP),并在检测副溶血性弧菌的报道在国外,还是有很多问题,如成本高,长期食用,不稳定和易于污染。迫切需要一种检测副溶血性弧菌的新方法。 理解副溶血性弧菌污染水市售产品,并建立一个简单,快速,灵敏的用于检测副溶血性弧菌基因TLH,TDH和TRH方法。 方法:首先,在高发季节食物中毒,20种鱼,虾,贝类,小龙虾,头和脚都按照传统的耕作方法和生理学方法收集,然后分离并鉴定了副溶血性弧菌161个样本bioquímico.ElTLH和副溶血性弧菌基因通过PCR检测和检测的毒力基因(TDH和TRH)和统计地分布。最后,使用11种O组血清分离和验证分离的副溶血性弧菌。研究血清群。 2.设计基因特异性赖氨酸不稳定副溶血性弧菌不稳定(TLH)和使反应体系(镁离子的浓度,甜菜碱浓度,内部引物和外部的比值)的6个特定位点上的LAMP引物组和在加入引物循环和反应条件(反应温度和反应时间)的进行了优化以建立LAMP检测副溶血性弧菌,然后74个菌株通过LAMP法的特异性进行了测试,并且梯度用稀释的基因组DNA,副溶血性弧菌和海鲜纯培养以评估检测灵敏度和PCR法的通用应用程序的价值的方法中使用LAMP.Se模拟样本检测进行比较。 3.设计或为分别设置LAMP基因特异性溶血毒素副溶血弧菌6个特异性位点(TDH和TRH),引物。用于分离LAMP 74种源性病原体的新的方法和条件制成alimentos.Se TDH基因和TLH的LAMP检测中,观察到的检测特异性和进行评价的方法的领域中的应用的值。 结果:1.由分离并通过PCR鉴定和验证的传统方法,副溶血性弧菌在161个样品检测45株,27.95%的检测的平均率为和Vp的在不同类型的水产品的检出率差异显着(χ2= 11.20,0.01p0.05),包括含有tdh基因的7株和含有trh基因的0株;副溶血性弧菌45个菌株的7种血清型划分,分别是基团OR 1表示2.2%(1/45),或3个基团表示的24.4%(45分之11),O:4组表示15.6%(7/ 45),O:5组代表的20.0%(9/45),O:4.4%9组表示(2/45),所述O组:10表示8.9%(4/45),所述O组:11代表26.7%(12/45)。 其次,反应体系和条件的优化显示,LAMP的检测TLH基因在镁离子8 mM的反应系统完成,甜菜碱0 M,内部和外部引物8:1和环引物40毫米,和反应在60℃下55分钟;在74个实验菌株方法副溶血性弧菌检测为阳性和其它细菌和空白对照为阴性。菌的基因组DNA的最低检测限为标准1FG,检出限纯的培养物为2.53×102 CFU / mL.En与普通PCR,仿真样品的检测限相比海鲜为9.42×102CFU / g(比普通PCR高1000倍)。在检测由TDH LAMP检测的74种食源性致病菌三,含有该基因TDH 7株副溶血性弧菌呈阳性,其他均为阴性;基因的LAMP检测单元检测出含有该基因的TRH TRH 74 alimentos.Una源性病原体副溶血性弧菌菌株为阳性,其余为阴性。 结论:常规调查,这项研究的副溶血性弧菌提供了部分参考在上海市售水产品副溶血性弧菌分布。与此同时,基于基因LAMP检测方法TLH,TDH和TRH本研究建立的是simple.Rápido,高灵敏度和高特异性,优化,改善和促进,因此预计将被施加到副溶血性弧菌监测在网站上的水产品。 [单元授予学位]:上海海洋大学[年级]:硕士学位[奖励年级]:2011年[分类号]:R155.3 下载全文 更多类似的文献
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